PCR實(shí)驗(yàn)室在臨床上又稱(chēng)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。理想的的標(biāo)準(zhǔn)PCR設(shè)計(jì)組合式實(shí)驗(yàn)室包括4個(gè)分區(qū)，分別是:試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，分區(qū)及其儀器設(shè)備配置參見(jiàn)下圖。

　　普通的 PCR 儀對(duì)標(biāo)本擴(kuò)增后，需再經(jīng)電泳或雜交實(shí)驗(yàn)分析，才能判斷標(biāo)本含有哪種細(xì)菌、病毒。

　　如果使用全自動(dòng)分析儀如實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，由于擴(kuò)增與分析集成在一臺(tái)儀器內(nèi)進(jìn)行，故擴(kuò)增區(qū)與分析區(qū)合并為一， PCR 實(shí)驗(yàn)室只需設(shè)置3個(gè)房間。PCR 兩種分區(qū)及其配置置參見(jiàn)下圖 。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)主要功能及相關(guān)要求描述:

　　試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)(I區(qū));儲(chǔ)存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備，可配置電泳溶液。試劑配置在潔凈臺(tái)內(nèi)操作，一般采用 900mm 的垂直單向流潔凈臺(tái)。冰箱一般為4℃冷藏柜。

　　標(biāo)本制備區(qū)(Ⅱ區(qū)):主要是核酸(RNA、DNA)的提取和純化，包括臨床標(biāo)本的保存、核酸儲(chǔ)存、核酸加人到擴(kuò)增反應(yīng)管、cDNA的合成。核酸提取時(shí)需使用苯酚、氯仿等有毒致癌物，高速離心后得到沉淀的 DNA。PCR反應(yīng)的*大特點(diǎn)是具有較大的擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但也正是這種特點(diǎn)，使得極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，因此核酸的純化操作應(yīng)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，為避免提取核酸氣溶膠在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本間交叉污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，*好采用全外排的ⅡB2生物安全柜。標(biāo)本及 DNA需在一20℃或-80℃的低溫冰箱中保存。處理大分子 DNA時(shí)使用超聲波水浴儀(水浴鍋)。房間相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入的氣溶膠污染。

　　擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)(Ⅲ區(qū)):主要進(jìn)行的操作為 DNA 或 cDNA 擴(kuò)增。巢式PCR 測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)潔凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。房間相對(duì)于產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)為正壓，相對(duì)于標(biāo)本制備區(qū)為負(fù)壓。

　　擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)(Ⅳ區(qū)):對(duì)擴(kuò)增后的產(chǎn)物種類(lèi)進(jìn)行分析，判斷是哪種細(xì)菌、病毒。對(duì)于普通的PCR 儀，目前*常用的方法是電泳分析。為防止分析產(chǎn)物污染其他區(qū)域，房間應(yīng)為負(fù)壓。設(shè)備中電熱板額定功率1~4kw，發(fā)熱量較大。

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